DSI515Ra02结肠炎大鼠模型一模型简介炎症性肠病Inflammatory Bowel Disease, IBD是一类慢性、复发性肠道炎症性疾病主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病临床以腹泻、腹痛及便血为主要表现其发病率在我国持续上升但病因与发病机制尚不完全明确临床缺乏根治手段。建立稳定可靠的动物模型是IBD基础研究与药物评价的关键基础。2,4,6-三硝基苯磺酸TNBS诱导的结肠炎模型是目前应用最广泛的化学诱导模型之一。其建立原理为乙醇破坏结肠黏膜屏障TNBS渗入肠壁并与组织蛋白结合形成完全抗原激活Th1/Th17介导的迟发型免疫应答诱发透壁性炎症。该模型病理特征包括黏膜溃疡、腺体破坏、炎性细胞浸润及纤维化与人类IBD高度相似。该模型操作简便、成模率高且可通过调整给药方案复制急性或慢性病程已广泛应用于IBD免疫机制探索及抗炎、免疫调节等候选药物的药效学评价是炎症性肠病研究领域的重要工具。材料1.货号DSI515Ra02云克隆提供2.实验动物SPF级SD大鼠雄性周龄为6w~8w体重为220~250g。三模型制作方法动物造模前禁食不禁水24 h乙醚吸入麻醉将一直径2.0 mm、长约12 cm的塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm缓慢注入100mg/kgTNBS的乙醇溶液将体积分数为5%的TNBS水溶液与无水乙醇以体积2:1混合现配现用1 min之内完成。灌药完毕后缓慢拔出塑胶管用手捏住肛门提起大鼠尾部持续倒置3min避免造模试剂流出使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。对照组动物使用等体积的生理盐水按上述同样操作进行灌肠。四模型评估模型的成功鉴定通常需要结合以下多个层面的评估1. 疾病活动指数 (DAI)DAI是评估结肠炎严重程度的经典临床指标综合反映动物的一般状态包括三个部分体重下降率观察并记录造模后动物的体重变化粪便性状评估大便是否变稀或呈水样便便血情况通过观察或检测粪便隐血评估肠道出血图一各组动物体重变化结果2. 大体解剖与器官指数在实验结束时通过解剖观察并测量相关器官可以获得直观的形态学证据结肠外观与长度观察结肠是否有粘连、溃疡、水肿和坏死。测量结肠长度模型组通常会出现结肠显著缩短。结肠组织大体评分按0~5分标准评估损伤程度0分无损伤1分充血无溃疡2分充血伴肠壁增厚无溃疡3分一处小溃疡最长径0~1 cm4分溃疡较大最长径1~2 cm5分溃疡较大最长径2 cm图二结肠长度测定结果3. 组织病理学检查组织病理学检查是判断模型成功的金标准能最直观地反映肠道损伤情况。主要通过苏木精-伊红HE染色观察切片并进行组织学评分HS半定量分析评估炎症程度、炎症范围和隐窝损伤三个维度。成功的模型应呈现黏膜上皮缺失、固有层腺体及杯状细胞数量减少、炎性细胞浸润等典型病理改变。此外通过Masson染色还可评估胶原纤维沉积用于研究慢性模型中的肠纤维化。4. 分子生物学与生化检测从分子层面揭示炎症和免疫反应的强度炎症因子检测通过ELISA等方法检测结肠组织或血清中的肿瘤坏死因子-αTNF-α、白细胞介素IL-6、IL-17、IL-1β等关键炎症因子的水平。髓过氧化物酶MPO活性MPO主要存在于中性粒细胞中其活性与组织内中性粒细胞浸润程度正相关是反映肠道急性炎症的敏感指标。免疫组化IHC与蛋白印迹Western Blot用于检测结肠组织中特定蛋白的表达。例如可检测CD3、CD4等免疫细胞标志物以及NF-κB p65、IL-17等信号通路和炎症相关蛋白。基因表达分析通过实时荧光定量PCRRT-qPCR 检测炎症相关基因的mRNA表达水平。5. 其他可选指标血清标志物检测血清中的D-乳酸、粪便白蛋白等可作为肠道屏障功能损伤的间接证据。氧化应激指标检测丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD 等评估氧化损伤程度图三肠组织HE染色代表性图像 上对照组下模型组广泛的应用场景1. 药物疗效评价TNBS模型是新药研发中候选化合物药效验证的核心平台已广泛应用于小分子化合物、中药复方及生物制剂的临床前评价。小分子与中药评价大量研究利用该模型验证了黄芪甲苷修复肠黏膜屏障、獐牙菜苦苷抑制PI3K/AKT通路、葛根芩连汤调控Th2/Th1及Tregs/Th17细胞平衡、健脾清热活血方影响HIF-1α和VEGF表达、四神丸及异甘草素通过Caspase-3/HMGB1/TLR4通路等多种药物的治疗效果。生物制剂与靶向药物肠道限制性RORγt拮抗剂SPH7854、AI开发的PHD抑制剂ISM012-042、抗TL1A抗体GB20-5A8-31等均在TNBS模型中完成了药效验证。天然产物筛选该模型尤其适用于天然产物的高通量抗炎筛选如阿福豆苷在TNBS诱导的克罗恩病样结肠炎中显示出治疗潜力。2. 发病机制研究TNBS模型为探究IBD的分子机制提供了理想的研究平台可用于免疫通路研究探究特定蛋白或信号通路在肠道炎症中的作用如PAD2通过调控巨噬细胞炎症因子表达参与TNBS诱导结肠炎的发病肠道屏障与细胞死亡研究肠上皮细胞凋亡、铁死亡等新型细胞死亡方式以及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin在黏膜屏障修复中的意义急慢性病程差异通过单次或重复诱导分别模拟急性炎症和慢性纤维化研究疾病进展的分子机制3. 新型药物递送系统验证由于IBD病灶位于结肠该模型是验证结肠靶向给药系统的理想工具。纳米制剂评价如负载布地奈德的pH/时间双重依赖纳米颗粒、白藜芦醇纳米抗氧化剂、鸦胆子苦素D自纳米乳递送系统等均在该模型中验证了靶向性和疗效干细胞与再生医学间充质干细胞MSC 局部移植、iPSC来源的MSC外泌体通过miR-34a-5p激活Wnt/β-catenin通路、骨髓MSC与小肠黏膜下基质水凝胶复合物等在该模型中展现出促进黏膜愈合的作用4. CRO药效评价服务鉴于TNBS模型的标准化和成熟度全球众多CRO公司将其列为IBD药物临床前评价的标准服务平台提供从模型构建、药效学评价、病理检测到免疫分型的一站式服务。可根据客户需求灵活定制急慢性结肠炎模型支持透壁性损伤评估、免疫激活分析和纤维化相关结局评价。六结语TNBS诱导的大鼠结肠炎模型已贯穿从新靶点发现、候选化合物筛选到新型制剂评价的整个药物研发价值链。作为IBD研究领域的标准化工具该模型在药物疗效评价、机制探索和新型递送系统验证等方面发挥着不可替代的作用。云克隆公司致力于为IBD研究提供高品质的模型构建解决方案。我们不仅提供高纯度TNBS诱导的结肠炎模型货号DSI515Ra02确保造模的稳定性和可重复性还提供覆盖炎症因子检测、组织病理学分析及分子生物学研究的全套配套检测服务。依托专业的技术支持团队云克隆将从模型构建到结果鉴定为您提供全程指导助力您的药物研发与机制探索。选择云克隆让您的IBD研究更加高效、可靠